1、制药行业无尘车间沉降菌动态测试方法
本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
2、使用的仪器和设备
2.1高压消毒锅：使用时应严格按照操作规程进行。
2.2 恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。
2.3培养皿
✧一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。
✧使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌30min。
3培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）。
✧将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
✧待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入30～35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2～8℃的环境中存放。
4测试步骤
4.1采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露4小时，单个沉降碟的暴露时间可以少于4 小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数，再将培养皿盖上盖后倒置。
4.2培养
✧全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
✧在30～35℃培养，时间不少于2天。
✧每批培养基应有对照试验，可每区域选定3只培养皿作对照试验，与采样皿同时操作但不需暴露采样，然后与采样后的培养皿一起放入培养箱内培养，结果应无菌落生长。
4.3菌落计数
✧用肉眼直接计数，然后用5～10倍放大镜检查，是否有遗漏。
✧若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。
5注意事项
5.1 测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
5.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。
5.3 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
5.4 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，必要时用显微镜鉴别。
5.5 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。
6 测试规则
6.1 测试状态
✧沉降菌测试前，被测试洁净区的温湿度须达到规定的要求，静压差必须控制在规定值内。
✧沉降菌测试前，被测试洁净区已经过消毒。
6.2 测试时间
✧对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。
6.3沉降菌计数
6.3.1采样点数目及其布置
✧最少采样点数目：沉降菌的最少采样点数可按下表确定。在满足最少测点数的同时，不宜满足最少培养皿数，见下表。
最少采样点数目：
面积（㎡） | |||
A 、B级 | C级 | D级 | |
<10 | 2-3 | 2 | 2 |
≥10-<20 | 4 | 2 | 2 |
≥20-<40 | 8 | 2 | 2 |
≥40-<100 | 16 | 4 | 2 |
≥100-<200 | 40 | 10 | 3 |
注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积，对于非单向流洁净室，指的是房间面积。 | |||
✧采样点的布置
——工作区测试点位置离地0.8～1.5m左右（略高于工作面）。
——可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点，采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏（如图3）。
6.4 记录：测试报告中应记录生产开始的时间以及测试时间、现场操作人员数量及位置、现场设备运转数量及位置、房间温度、相对湿度、压差、测试状态及测试数据。
6.5结果计算
单个沉降碟的暴露时间可以少于4 小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数。
6.6 结果评定
6.6.1用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。
6.6.2 洁净区内的平均菌落数必须符合所选定的评定标准。
6.6.3 若某洁净区的菌落数超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新测试两次，测试结果必须合格。
测定结果见附件。
附件 洁净区沉降菌测试记录 验证记录样张
洁净级别： 测试状态： 测试人员数：
房间名称 | 温度（℃） | 相对湿度（%） | 培养皿 | 平均数 | 备注 | ||||
1 | 2 | 3 | 4 | ||||||
空 白 | |||||||||
验 证 结 果 评 定 | |||||||||
操作人/日期： 复核人/日期：
